??高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是色譜法的一個(gè)重要分支，應(yīng)用范圍十分廣泛，對(duì)樣品的適用性廣，不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，包括但不限于高分子化合物、離子型化合物、熱不穩(wěn)定性化合物以及有生物活性的化合物，都能通過(guò)搭配不同檢測(cè)器的HPLC進(jìn)行分離檢測(cè)。
歷史由來(lái)：
20世紀(jì)初，俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特（Tswett）發(fā)現(xiàn)一個(gè)特別有趣的現(xiàn)象，他將碳酸鈣填充進(jìn)豎立的玻璃管，上方加入植物色素，然用石油醚淋洗，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間洗脫之后，植物色素在碳酸鈣柱中實(shí)現(xiàn)分離，由一條色帶分散為數(shù)條平行的色帶，茨維特使用色譜法 chromatography （來(lái)自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來(lái)描述他的彩色試驗(yàn)。（令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）
圖1
20世紀(jì)60年代末，科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開(kāi)發(fā)了世界上第一臺(tái)液相色譜法色譜法色譜法色譜法，開(kāi)啟了色譜時(shí)代。
工作原理：
高效液相色譜儀由溶劑輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。
工作時(shí)儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵壓入檢測(cè)系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入色譜系統(tǒng)，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，在其通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，被轉(zhuǎn)換成信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出。
圖2 高效液相色譜儀的系統(tǒng)組成
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：
高效液相色譜法有“三高一廣”的特點(diǎn)：
①高壓：高效液相色譜儀供液和進(jìn)樣壓力大，壓力為150-350bar。
②高速：分析速度快、流動(dòng)相流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度要快得多，通常分析一個(gè)樣品在 15～30 分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于 1 小時(shí)。
③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔的分離效能高出許多倍。
④應(yīng)用范圍廣：70%以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物分離分析，具有優(yōu)勢(shì)。
高效液相色譜儀的應(yīng)用：高效液相色譜具有“三高一廣”、檢測(cè)靈敏度好、尤其適用于沸點(diǎn)高且熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的分析，主要被應(yīng)用于醫(yī)藥、精細(xì)化工及化妝品等行業(yè)等領(lǐng)域，應(yīng)用范圍較廣。在醫(yī)藥研究分析中的應(yīng)用：
①分離分析藥物的組分含量；
②藥物生產(chǎn)中進(jìn)行中間控制；
③分析藥物在體內(nèi)的殘量；
④測(cè)定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物，特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況。
在化妝品行業(yè)的應(yīng)用：化妝品對(duì)人體皮膚有害物質(zhì)的含量會(huì)影響個(gè)人的皮膚健康。采用液相色譜法可以測(cè)定化妝品中某些有害物質(zhì)的成分和含量。
①化妝品中禁用物質(zhì)中的應(yīng)用：抗生素、激素、氫醌等；
②化妝品中防腐劑中的應(yīng)用：甲基異噻唑啉酮、苯氧乙醇、尼泊金酯，再如辛酰羥肟酸等防腐劑助劑，也能進(jìn)行含量的分析；
③有特定功效的化妝品原料篩查；
④化妝品中防曬劑、著色劑中的應(yīng)用。
隨著科技的進(jìn)步，色譜應(yīng)用越來(lái)越廣泛，必定能為化妝品行業(yè)提供強(qiáng)有力的支撐，促進(jìn)化妝品良性快速地進(jìn)步。
復(fù)制
